簡介

盡管存在解（jiě）剖和生理上（shàng）的差異，小鼠在研究人類肺部疾病，包括（kuò）急性肺損傷（shāng）（ALI）和肺纖維化方麵（miàn）仍具有極高的價值。治療方法是諸多肺部疾病研究的核心，其中口咽吸入法（OPA）已被廣泛用，但其缺點是部分藥劑可能（néng）被吞入胃（wèi）腸道，從（cóng）而導致給藥（yào）劑量的不準確；另一（yī）種是經氣管給（gěi）藥，這涉及到在深度麻醉狀態下切開（kāi）氣管直接將（jiāng）藥物（wù）注入到呼吸道，然而，這種操作不僅因其侵入性和造成呼吸道（dào）損傷而不可取，還存在耗時過（guò）長，且操作者需要大量的訓練等問題。

1999年，Brown等人發表研究論文描述了一種小鼠肺部直接插管的（de）方法，後續（xù）也（yě）有其（qí）他幾篇論文描述了不同的小鼠肺部插管方法，但這種插管的主要問題是：當插管導管接近氣管並準備插入時，導管本身會阻擋光線，從而無法看清需要插入的（de）位置。

本文展示了如何簡單、低成本地消除這個可視化問題，從而確保在相對少的（de）培訓或經（jīng）驗下成功進行插管。

方法

準備：

1、導管。對於20-35 g小鼠的插管，我們使用1或1.5英寸長，20 g IV導管(BD Insylte, Sparks, MD或Jelco Optiva, Carlsbad, CA)。可以為每隻小鼠使用新的（de）無（wú）菌導管，但導管也可以（yǐ）在消毒後用70%乙醇浸泡過夜重複使用。盡管小鼠（shǔ）的（de）咽部和氣管不是無菌的，但應遵循適當的（de）清潔程序，包括使用無菌手套（tào）和（hé）器械。

2、光纖電（diàn）纜。我們使用約70厘米長、0.5毫米粗的Edmund Optics光（guāng）纜，但長度不是決定性的因素。重要的是要（yào）確保（bǎo）纖維的邊緣是平（píng）滑的，因為在用剃刀切割電纜後，邊緣相對較銳利，很容易刺（cì）穿氣管壁。然而隻需將光纖端部放在1000粒（lì）度的砂紙（zhǐ）上，就可以非常容易地打（dǎ）磨平這個邊緣。另一端插入橡膠（jiāo）塞中。最簡便的方法是先（xiān）用18號針通過（guò）橡膠（jiāo）塞，插入光纖通過針孔，然（rán）後撤出針（zhēn）。橡膠塞連接150瓦鹵素光源。重要（yào）的是要確保使用矽膠橡膠塞（sāi）(或其他耐（nài）熱材料)，因為普通橡膠或軟木在靠近熱光源時可能會燃燒。

插管：

1、參見圖1和2。通過一段短矽橡膠管(ID≈0.8 mm×OD 4mm, Cole-Palmer, EW-96410-13)插入光纖電纜。將這個橡膠管係（xì）緊（jǐn），同時仍然（rán）允（yǔn）許調整（zhěng）光纖電纜。將矽膠管緊密地插（chā）入套管（guǎn）的魯爾端，固定光纖（xiān）電纜在套管內的位置。調整（zhěng）光纖（xiān）電纜的位置，使其在套管尖端前方約4毫（háo）米處穿過套管。

圖（tú）1.如圖所示，光纜（lǎn）插入矽橡膠塞中，與其相（xiàng）對的（de）另一端緊綁著一小段矽橡膠管。

圖2.圖片展示了橡膠塞（sāi）與（yǔ）光源的連（lián）接，光纖的另一端穿過插管導（dǎo）管。左側還展示了一個簡（jiǎn）單的支架，用於在插管過程中固定小鼠。

2、將麻醉（zuì）後的小鼠放置在垂直支架上（shàng），由其上切牙（yá）懸掛(圖3)。大多（duō）數研究者發現，當小鼠（shǔ）的腹（fù）側麵向自己時（shí），視覺效果最佳。非常輕（qīng）柔地（dì）拔出舌頭，用拇指和食（shí）指握住。中指放（fàng）在（zài）頸部和塑料支架之間。利用食指和拇指對舌頭的牽引開啟口腔，並（bìng）用頸部（bù）後方的中指調整頭（tóu）部的角度，使插管路徑伸直，如圖3所（suǒ）示。

圖3.兩個視角展示了準備插管的小鼠位置

3、使用光纖電纜作為光源（yuán）和導入器，推動它（tā）通（tōng）過可視化聲帶。如果看不到聲帶（dài），可以通過中指作為支點，輕輕用力拉舌頭。插入後，將套管再向前（qián）推進約5 mm。然後，小心不要移動（dòng）套管，拔（bá）出光纖電纜。將小鼠平躺下來，用膠帶固定（dìng）導管，並用橡皮泥(塑型（xíng）黏土（tǔ）)支撐導管接頭，如圖4所示。

圖4。此圖展（zhǎn）示了一隻準備通氣的已插管（guǎn）小鼠。圍繞嘴部的膠帶有助於防止導（dǎo）管移動。一小塊橡皮泥(建模黏（nián）土（tǔ）)提（tí）供了一個便利（lì）的支撐點，用於固定導（dǎo）管接（jiē）頭與（yǔ）呼吸機的連接。

4、步驟3中的（de）操作不容易演示或教學，因為這是一個單獨的操作。然（rán）而，通（tōng）過對舌頭的牽（qiān）引（yǐn）力和（hé）頭部後麵（miàn）的支撐的微妙調整，幾乎所有（yǒu）嚐試這種方法的人都（dōu）會很（hěn）快找到正確的方式來調整小鼠的位置，使聲（shēng）帶可（kě）視化。

總結

本文描述的（de）方法有幾個優點。首（shǒu）先，裝置簡單（dān）且價格低廉。製作（zuò）裝置（zhì）不需要任何特殊工具或昂貴的設備。在實踐中，對於從未嚐試過插管的研（yán）究員、學生和技（jì）術人員來說更容（róng）易掌握。

在（zài）進行插管時，有幾個實（shí）際問題需要（yào）提及。在最初（chū）打開小鼠口腔時，盡量輕柔拉舌頭非常重要。如（rú）果（guǒ）使用無保護鉗，很容易損傷舌（shé）頭，這可能（néng）導致小鼠死亡（wáng）。在首次學習如何（hé）插管時，最重要的是使用頸部後方的（de）手指來調整頭部角度，以使氣管開口的可視化。如果操作正確，對舌（shé）頭進行足夠的（de）牽拉，很容易看到（dào）聲（shēng）帶。最初的可視化步驟（zhòu）通常需要最多的時間，因為一旦看到（dào）氣（qì）管開口，插入纖維（wéi）電纜和靜脈導（dǎo）管（guǎn）就相對簡單了。

總之，本文描述的插管方法製作成本低（dī），使用（yòng）簡單（dān），可（kě）以令大（dà）多數研究人員和實驗室技術人員在相對較少的經（jīng）驗下快速掌握小鼠插管技術。